轉(zhuǎn)染試劑的作用原理是什么,有哪些轉(zhuǎn)染方法?
2021-01-26 4534
轉(zhuǎn)染試劑通過納米技術(shù)合成，通過物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動物和器官組織的功能，可以多次在同一動物注射。
隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。轉(zhuǎn)染試劑能做到高達90%的轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染時不需要去除血清，對細胞損傷較小，對貼壁細胞和懸浮細胞均適用。
轉(zhuǎn)染根據(jù)是否能把外源核酸整合到宿主染色體上分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時轉(zhuǎn)染：外源性DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一次宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但是通常只能維持幾天，多用于啟動子以及其他調(diào)控元件的分析。一般在24-96小時內(nèi)分析結(jié)果。核酸類型比較廣泛，質(zhì)粒DNA、siRNA、miRNA、和mRNA都可進行瞬時轉(zhuǎn)染。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：通過這種轉(zhuǎn)染方式外源性DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。外源DNA整合到宿主染色體中概率很小，大約1/10000轉(zhuǎn)染細胞能整合，通常需要通過轉(zhuǎn)染試劑來做選擇性標(biāo)記，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的核酸多為質(zhì)粒DNA。
